====== Extraction, séparation, fluorescence de la chlorophylle d'un végétal ======

Dans cet atelier nous allons parcourir :

  * Extraction de pigment chlorophyllien brute
  * Séparation des pigments chlorophylliens par chromatographie
  * Mise en évidence de la fluorescence chlorophyllienne

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===== Extraction de pigment chlorophyllien brute =====

==== Matériels ====

  * Une poignée de feuilles bien vertes
  * Un bol ou mortier assez solide pour résister au pilonnage
  * Un pilon
  * Du sable
  * Entonnoir
  * Papier filtre non traité (Utilisation de dioxyde de chlore comme agent de blanchiment dans le processus de fabrication du papier. Le papier blanchi peut contenir des colorants ou du chlore).
  * Un verre / Becher
  * Un tube à essai
  * Acétone

==== Procédure ====

Nous souhaitons extraire les pigments contenus dans les cellules des feuilles d'un végétal.

Découper quelques feuilles de vertes d'un végétal dans un mortier.

Ajouter du sable pour augmenter la destruction mécanique cellulaire lors du pilonnage.

Ajouter de l'acétone pour faciliter une destruction chimique des cellules.

Passer au pilon jusqu'à obtenir un liquide vert intense.

Placer l’entonnoir avec filtre au dessus d'un verre de réception du liquide.

Dans l'entonnoir drapé de filtre papier, verser le contenu du mortier.

<note tip>On obtient alors une solution alcoolique de chlorophylle « brute »</note>

===== Chromatographie =====

Ici nous cherchons à déterminer quel pigment sont présent dans la coloration verte des feuilles du végétal

==== Matériels ====


  * Solvant organique de composition : 85% Ether ; 10% acétone ; 5% cyclohexane C<sub>6</sub>H<sub>12</sub>
  * Pipettes
  * Papier de chromatographie (même recommandation que pour les filtres)
  * Un tube à chromatographie
  * Un bouchon
  * Un système pour suspendre la bande de papier depuis le bouchon
  * Un cache permettant de placer le tube à chromatographie dans l'obscurité pour 30 à 50 minutes

==== Procédure ====

Sur une bande de papier à chromatographie, tracer un trait au crayon à bois à 2cm au dessus du bord du bas.

Dans le tube à chromatographie, verser ~2 cl de solvant de composition.

Pipeter dans solution alcoolique de chlorophylle « brute ».

Sur la bande de papier, juste au-dessus du trait, pipeter 1 à 2 gouttes de chlorophylle « brute ».

Fixer le papier en suspension sur le bouchon, placer le papier dans le tube à chromatographie : **la bande de papier doit toucher la solvant de composition et ne le ligne de flottaison du solvant doit restée ne dessous du trait tracé**.

Boucher le tube à chromatographie.

Placer dans le noir pour 30 à 50 minutes.

Sortir la bande de papier à chromatographie.

==== Observation ====

Pour cette étape, on peut placer un double décimètre à coté de la bande de chromatographie.

Nous avons, du bas vers le haut (ce qui est le sens de migration des pigments), :

  - La ligne de dépôt initial
  - Une colonne colorée de différentes variations qui monte sur le papier
    - le 1<sup>er</sup> amas de couleur verte : **Chlorophylle A**
    - le 2<sup>nd</sup> amas de couleur verte : **Chlorophylle B**
    - le 3<sup>ème</sup> amas : **Xantophylle**
    - le 4<sup>ème</sup> amas tirant sur le jaune orange : **Carotène**
    - Si un amas orangé rouge : **Anthocyanes**
    - La dernière ligne : Front de migration
 
 



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