Kaouenn-noz

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====== Le partage de plasmide (ébauche à relire) ======

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Les plasmides sont des ADN circulaire double brin qui permettent facilement d'exprimer des gènes dans une bactéries ou des cellules eukaryotes. Ils sont relativement facile à manipuler, modifier et à purifier. Et surtout il existe de multiple banque de plasmide qui permettent récupérer des plasmides mi à disposition par d'autres.

Si l'accès à ces banque de plasmides est relativement simple le prix d'entrée peut être prohibitif pour qui n'en a pas les moyen (autour de 75$ le plasmide addgene (65€)) plus le fait que certaines de ces banques sont localisées à l'étranger et doivent donc franchir les douanes ce qui peut s'avérer problématique étant donné qu'il s'agit de matériel biologique et que de fait la réglementation concernant chaque pays est plus ou moins compliqué.

De fait dans les collaborations de recherches il est courant de s'échanger les plasmides directement.

ATTENTION : Faites attention aux procédures de transfère qui peuvent différé d'un état à l'autre, et aux autorisations potentielle qu'il s'agit d'obtenir pour s'éviter des ennuie inutiles à postériori ;)

=====     1. Sous forme liquide     =====

Le plus simple est probablement de transférer à celui qui le cherche un plasmide en phase liquide. Le plus souvent  les plasmides sont solubilisé dans de l'eau distillé et stérilisé si possible pour limiter le risque de dégradation de l'ADN.

On donne souvent quelques ug d'ADN ce  qui est largement suffisant pour tester directement le plasmide/le répliquer/le séquencer. à mettre dans un tube étanche il peut passer quelques jours à température ambiante sans trop de risque au delà il faut le maintenir au frais à 4°C voir le congeler pour limiter tout risque de dégradation.

===== 2. Sous forme sèche =====

On prend quelques microgramme d'ADN en solution et on le fait absorber par un papier en cellulose sans additif de préférence (les papiers classiques sont souvent traité au Chlore ce qui peut dégrader le plasmide). On trace au crayon le contour de la goutte qui a été absorbé. On laisse sécher, idéalement le papier est placé dans une petite protection étanche en plastique pour éviter le contact avec des contaminants.

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A réception on découpe la zone délimité au crayon. On la place dans un petit volume d'eau distillé (environ 50ul-100ul de quoi immerger le papier) pendant au moins une dizaine de minutes (certain font moins d'autre plus, personnellement c'est plutôt une bonne heure). On peut ensuite prélever une partie de la solution pour transformer (c-a-d: mettre le plasmide à l'intérieur) des bactéries pour leur faire produire le plasmide.

===== 3. Clone bactérien =====

Il est possible de partager les bactéries qui contiennent le plasmide ce qui permet au receveur de lancer une production de plasmide à la réception. L'envoie peut se faire sous forme de gélose d'agar + LB +  antibiotique de sélection du plasmide.\\
Attention dans ce cas on est dans la catégorie matériel biologique OGM vivant. Les contrôles et procédures de transfère sont bien plus lourde et il vaut mieux s'assurer de la conformité de la paperasse avant de se lancer ;)