protocole:techniques:introduction_aux_techniques_extraction_adn
Différences
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Ligne 11: | Ligne 11: | ||
===== Intro ===== | ===== Intro ===== | ||
- | Le premier isolement de l' | + | Le premier isolement de l' |
<WRAP center round tip 60%> | <WRAP center round tip 60%> | ||
Ligne 24: | Ligne 24: | ||
==== Procédure standard ==== | ==== Procédure standard ==== | ||
- | === Extraction organique === | + | //Un fois l' |
- | === Extraction | + | - Il nous faut ouvrir les membranes cellulaires pour exposer l'ADN et le cytoplasme qu' |
+ | * Les lipides de la membrane cellulaire et du noyau sont décomposés à l'aide de détergents et de surfactants. | ||
+ | * Dégradation des protéines | ||
+ | * Décomposition de l'ARN par l' | ||
+ | - La solution est traitée avec une solution saline concentrée afin d' | ||
+ | - Centrifugation de la solution, qui sépare les débris cellulaires agglutinés de l' | ||
+ | - Purification de l'ADN à partir des détergents, | ||
+ | * Précipitation à l' | ||
+ | * Extraction phénol-chloroforme dans laquelle le phénol dénature les protéines de l' | ||
+ | * Purification sur minicolonne qui repose sur le fait que les acides nucléiques peuvent se lier (adsorption) à la phase solide (silice ou autre) en fonction du pH et de la concentration en sel du tampon. | ||
- | === Extraction par phase solide === | + | //Voir aussi : [[: |
- | === voir également === | + | Les protéines cellulaires et histones liées à l'ADN peuvent être éliminées soit par l' |
+ | |||
+ | Après l' | ||
+ | |||
+ | <WRAP center round tip 60%> | ||
+ | Un Tampo TE se compose : | ||
+ | |||
+ | * d'un [[wp> | ||
+ | * d'une Eau purifiée / déminéralisée / dé-ionisée | ||
+ | </ | ||
+ | |||
+ | |||
+ | |||
+ | ==== Extraction organique ==== | ||
+ | |||
+ | ==== Extraction par chélation ==== | ||
+ | |||
+ | La méthode d' | ||
+ | |||
+ | Les matières cellulaires se lient aux billes de la solution de chélation, tandis que l'ADN devient disponible dans la couche liquide qui surnage. | ||
+ | |||
+ | La méthode par chélation est beaucoup plus rapide et plus simple que l' | ||
+ | |||
+ | Désavantage, | ||
+ | |||
+ | < | ||
+ | Le produit de marque Chelex 100((" | ||
+ | |||
+ | |||
+ | Une résine chélatrice inerte présente l' | ||
+ | |||
+ | |||
+ | Le Chelex 100 est onéreux ! | ||
+ | |||
+ | |||
+ | Théoriquement, | ||
+ | </ | ||
+ | |||
+ | ==== Extraction par phase solide ==== | ||
+ | |||
+ | ==== voir également ==== | ||
+ | |||
+ | **Autres Chélateurs**(([[https:// | ||
+ | |||
+ | * [[wp> | ||
+ | * [[wp> | ||
+ | * 2,2 Bypidryl | ||
+ | * [[wp> | ||
+ | |||
+ | ===== Méthodes pour cas spécifiques ===== | ||
+ | |||
+ | Des techniques spécifiques doivent être choisies pour isoler l'ADN de certains échantillons pour lesquels l' | ||
+ | |||
+ | * les échantillons contenant des inhibiteurs des procédures d' | ||
+ | * les échantillons provenant de micro-organismes à paroi cellulaire épaisse, par exemple les levures | ||
+ | * les échantillons contenant de l'ADN mélangé provenant de sources multiples | ||
+ | * * les échantillons archéologiques contenant de l'ADN partiellement dégradé, voir de l'ADN très ancien | ||
+ | |||
+ | L'ADN extrachromosomique est généralement facile à isoler, en particulier pour les plasmides peuvent être facilement isolés par lyse cellulaire suivie d'une précipitation des protéines, ce qui piège l'ADN chromosomique dans la part insoluble et après centrifugation, | ||
+ | |||
+ | L' | ||
{{tag> ADN Protocole}} | {{tag> ADN Protocole}} |
protocole/techniques/introduction_aux_techniques_extraction_adn.1636470706.txt.gz · Dernière modification : 2021/11/09 15:11 de xavcc