Différences

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 ===== Intro =====
-Le premier isolement de l'acide désoxyribonucléique (ADN) a été effectué en 1869 par Friedrich Miescher.
+Le premier isolement de l'acide désoxyribonucléique (ADN) a été effectué en 1869 par [[wp>fr:Friedrich Miescher|Friedrich Miescher]].
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         * Extraction phénol-chloroforme dans laquelle le phénol dénature les protéines de l'échantillon. Après centrifugation de l'échantillon, les protéines dénaturées restent dans la phase organique tandis que la phase aqueuse contenant l'acide nucléique est mélangée avec du chloroforme pour éliminer les résidus de phénol de la solution.
         * Purification sur minicolonne qui repose sur le fait que les acides nucléiques peuvent se lier (adsorption) à la phase solide (silice ou autre) en fonction du pH et de la concentration en sel du tampon.
+//Voir aussi : [[:protocole:techniques:billes_silicates_purification_adn|Billes de silicates et purification d'ADN]]//
 Les protéines cellulaires et histones liées à l'ADN peuvent être éliminées soit par l'ajout d'une protéase, soit en ayant précipité les protéines avec de l'acétate de sodium ou d'ammonium, soit en les extrayant avec un mélange phénol-chloroforme avant la précipitation de l'ADN.
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-=== Extraction organique ===
+==== Extraction organique ====
+==== Extraction par chélation ====
+La méthode d'extraction par chélation consiste à ajouter une résine (parfois de marque Chelex des [[wp>Bio-Rad Laboratories]]) à l'échantillon dans un tube, à faire chauffer la solution (optionnel selon le protocole((Chelex without boiling, a rapid and easy technique to obtain stable amplifiable DNA from small amounts of ethanol‐stored spiders. Juliane Casquet, C. Thébaud, R. Gillespie. DOI:10.1111/j.1755-0998.2011.03073.x)) ), puis à la soumettre à un vortex et à la centrifuger.
+Les matières cellulaires se lient aux billes de la solution de chélation, tandis que l'ADN devient disponible dans la couche liquide qui surnage.
+La méthode par chélation est beaucoup plus rapide et plus simple que l'extraction organique, et elle ne nécessite qu'un seul tube, ce qui diminue le risque de contamination de l’échantillon d'ADN.
+Désavantage, l'extraction par chélation ne permet pas d'obtenir une quantité très importante et l'ADN obtenu est [[wp>fr:monocaténaire]], ce qui signifie qu'il ne peut être utilisé que pour des analyses basées sur la PCR et non pour la méthode de [[wp>fr:Polymorphisme_de_longueur_des_fragments_de_restriction|polymorphisme de longueur des fragments de restriction]] (ou RFLP, de l'anglais restriction fragment length polymorphism)
+<note>
+Le produit de marque Chelex 100(("[[https://web.archive.org/web/20210223192349/https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/LIT200.pdf|Chelex® 100 and Chelex 20 Chelating Ion Exchange Resin Instruction Manual]]" (PDF) )) est une résine chélatrice de cations, destinée à appauvrir la solution en cations divalents (principalement) de sorte que les enzymes qui en dépendent soient inactives.
+Une résine chélatrice inerte présente l'avantage de ne pas devoir être purifiée de la solution par la suite.
+Le Chelex 100 est onéreux !
+Théoriquement, tout chélateur à haute affinité peut être utilisé, à condition qu'il ait une affinité très élevée pour le magnésium, le manganèse, le calcium (qui peut être catalytique ou inhibiteur) et les ions similaires.
+</note>
+==== Extraction par phase solide ====
+==== voir également ====
+**Autres Chélateurs**(([[https://openwetware.org/wiki/User:Alexander_Cvitan/Notebook/Experimental_Biological_Chemistry_Lab ]]2014/01/29|Alexander Cvitan/Notebook/Experimental Biological Chemistry Lab/2014/01/29)) potentiels
+  * [[wp>fr:EDTA]], acide éthylènediaminetétraacétique
+  * [[wp>EGTA_(chemical)|EGTA]] egtazic acid
+  * 2,2 Bypidryl
+  * [[wp>fr:Acide_salicylique|Acide Salicylique]]
+===== Méthodes pour cas spécifiques =====
+Des techniques spécifiques doivent être choisies pour isoler l'ADN de certains échantillons pour lesquels l'isolement de l'ADN est compliqué sont
-=== Extraction par chélation ===
+   * les échantillons contenant des inhibiteurs des procédures d'analyse ultérieures, plus particulièrement des inhibiteurs de la PCR, tels que l'acide humique du sol, l'indigo et d'autres colorants textiles ou l'hémoglobine dans le sang
+  * les échantillons provenant de micro-organismes à paroi cellulaire épaisse, par exemple les levures
+  * les échantillons contenant de l'ADN mélangé provenant de sources multiples
+  * * les échantillons archéologiques contenant de l'ADN partiellement dégradé, voir de l'ADN très ancien
-=== Extraction par phase solide ===
+L'ADN extrachromosomique est généralement facile à isoler, en particulier pour les plasmides peuvent être facilement isolés par lyse cellulaire suivie d'une précipitation des protéines, ce qui piège l'ADN chromosomique dans la part insoluble et après centrifugation, l'ADN plasmidique peut être séparé puis purifié à partir de la part soluble.
-=== voir également ===
+L'extraction d'ADN par procédure Hirt consiste à isoler tout l'ADN extrachromosomique d'une cellule de mammifère. Le processus d'extraction de Hirt élimine l'ADN nucléaire (plus grand haut poids moléculaire), ne laissant que l'ADN mitochondrial (plus faible poids moléculaire) et les épisomes viraux éventuellement présents dans la cellule.
 {{tag> ADN Protocole}}