Outils pour utilisateurs

Outils du site


protocole:techniques:introduction_aux_techniques_extraction_adn

Différences

Ci-dessous, les différences entre deux révisions de la page.

Lien vers cette vue comparative

Les deux révisions précédentesRévision précédente
Prochaine révision
Révision précédente
protocole:techniques:introduction_aux_techniques_extraction_adn [2021/11/09 15:58] – [Extraction par chélation] ajout de notes de bas pages xavccprotocole:techniques:introduction_aux_techniques_extraction_adn [2021/11/09 16:18] (Version actuelle) – [Procédure standard] ajout delien vers future page xavcc
Ligne 11: Ligne 11:
 ===== Intro ===== ===== Intro =====
  
-Le premier isolement de l'acide désoxyribonucléique (ADN) a été effectué en 1869 par Friedrich Miescher.+Le premier isolement de l'acide désoxyribonucléique (ADN) a été effectué en 1869 par [[wp>fr:Friedrich Miescher|Friedrich Miescher]].
  
 <WRAP center round tip 60%> <WRAP center round tip 60%>
Ligne 36: Ligne 36:
         * Extraction phénol-chloroforme dans laquelle le phénol dénature les protéines de l'échantillon. Après centrifugation de l'échantillon, les protéines dénaturées restent dans la phase organique tandis que la phase aqueuse contenant l'acide nucléique est mélangée avec du chloroforme pour éliminer les résidus de phénol de la solution.         * Extraction phénol-chloroforme dans laquelle le phénol dénature les protéines de l'échantillon. Après centrifugation de l'échantillon, les protéines dénaturées restent dans la phase organique tandis que la phase aqueuse contenant l'acide nucléique est mélangée avec du chloroforme pour éliminer les résidus de phénol de la solution.
         * Purification sur minicolonne qui repose sur le fait que les acides nucléiques peuvent se lier (adsorption) à la phase solide (silice ou autre) en fonction du pH et de la concentration en sel du tampon.         * Purification sur minicolonne qui repose sur le fait que les acides nucléiques peuvent se lier (adsorption) à la phase solide (silice ou autre) en fonction du pH et de la concentration en sel du tampon.
 +
 +//Voir aussi : [[:protocole:techniques:billes_silicates_purification_adn|Billes de silicates et purification d'ADN]]//
  
 Les protéines cellulaires et histones liées à l'ADN peuvent être éliminées soit par l'ajout d'une protéase, soit en ayant précipité les protéines avec de l'acétate de sodium ou d'ammonium, soit en les extrayant avec un mélange phénol-chloroforme avant la précipitation de l'ADN. Les protéines cellulaires et histones liées à l'ADN peuvent être éliminées soit par l'ajout d'une protéase, soit en ayant précipité les protéines avec de l'acétate de sodium ou d'ammonium, soit en les extrayant avec un mélange phénol-chloroforme avant la précipitation de l'ADN.
Ligne 78: Ligne 80:
  
 ==== voir également ==== ==== voir également ====
 +
 +**Autres Chélateurs**(([[https://openwetware.org/wiki/User:Alexander_Cvitan/Notebook/Experimental_Biological_Chemistry_Lab ]]2014/01/29|Alexander Cvitan/Notebook/Experimental Biological Chemistry Lab/2014/01/29)) potentiels
 +
 +  * [[wp>fr:EDTA]], acide éthylènediaminetétraacétique
 +  * [[wp>EGTA_(chemical)|EGTA]] egtazic acid
 +  * 2,2 Bypidryl
 +  * [[wp>fr:Acide_salicylique|Acide Salicylique]]
 +
 +===== Méthodes pour cas spécifiques =====
 +
 +Des techniques spécifiques doivent être choisies pour isoler l'ADN de certains échantillons pour lesquels l'isolement de l'ADN est compliqué sont
 +
 +   * les échantillons contenant des inhibiteurs des procédures d'analyse ultérieures, plus particulièrement des inhibiteurs de la PCR, tels que l'acide humique du sol, l'indigo et d'autres colorants textiles ou l'hémoglobine dans le sang
 +  * les échantillons provenant de micro-organismes à paroi cellulaire épaisse, par exemple les levures
 +  * les échantillons contenant de l'ADN mélangé provenant de sources multiples
 +  * * les échantillons archéologiques contenant de l'ADN partiellement dégradé, voir de l'ADN très ancien
 +
 +L'ADN extrachromosomique est généralement facile à isoler, en particulier pour les plasmides peuvent être facilement isolés par lyse cellulaire suivie d'une précipitation des protéines, ce qui piège l'ADN chromosomique dans la part insoluble et après centrifugation, l'ADN plasmidique peut être séparé puis purifié à partir de la part soluble.
 +
 +L'extraction d'ADN par procédure Hirt consiste à isoler tout l'ADN extrachromosomique d'une cellule de mammifère. Le processus d'extraction de Hirt élimine l'ADN nucléaire (plus grand haut poids moléculaire), ne laissant que l'ADN mitochondrial (plus faible poids moléculaire) et les épisomes viraux éventuellement présents dans la cellule. 
  
 {{tag> ADN Protocole}} {{tag> ADN Protocole}}
protocole/techniques/introduction_aux_techniques_extraction_adn.1636473496.txt.gz · Dernière modification : 2021/11/09 15:58 de xavcc